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Fettuccine Alfredo

Modernist Cuisine at Home risponde alla stessa esigenza alla base di Modernist Cuisine: il Cooking Lab ha applicato metodi innovativi per rivoluzionare alcune ricette tradizionali come gli hamburger o le ali di pollo. In passato, Nathan ha lavorato per Microsoft, dove, tra le altre cose, ha fondato Microsoft Research.

Dopo due anni di apprendistato presso il prestigioso ristorante francese Rover's di Seattle, ha seguito i corsi della scuola di cucina La Varenne e ha lavorato come chief gastronomic officer per l'editore Zagat Survey. Modernist Cuisine at Home is destined to change the way we cook and the way we use recipes.

For all of us who cook regularly, this book opens up a whole new world of possibilities. It is full of insights that encourage us to try something new, and that teach us something on every single page. Most importantly, it ignites a curiosity within and compels us to ask ourselves not 'What should we make for dinner? Essendo frutto del lavoro di uno chef-scienziato entrambe le opera sono state stampate su carta resistente all'acqua e lavabile, dettaglio da non sottovalutare quando si lavora in cucina! Convert currency. Add to Basket. Compare all 6 new copies.

Book Description Taschen, Condition: New. Seller Inventory M More information about this seller Contact this seller. Never used!. Seller Inventory P Book Description Cooking Lab.

Traditional Alfredo Pasta

Condition: Brand New. In Stock. Seller Inventory Book Description Taschen. I work with muscle glucose metabolism and multiple groups have performed and published measurement of fluorescent 2-deoxy glucose uptake into mouse single fibers H. Westerblad in Sweden, for instance. Perhaps something to consider as an alternative to tracers Hi Thom, I'm very happy you found this video useful.

Time wise, I'd say it takes me 1.

NEW CITY LINE

I normally work with the muscle for min then I put it back in the incubator for 5 min and then work again for other and repeat this cycle till I have enough fibers. I'd say max time allowed for this step is one hour. I normally perform 3 washes, sometimes more than 3 if I have lot of debris or fibers. I find this extra step increases fiber viability.


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I agree with you. My guess would be that the collagenase treatment wasn't long enough. I normally visually inspect for fibers coming out the muscle and stop when it reaches that point. If i see one or two fibers coming out I then wait extra min and then stop. It's probably not that clear from the video but when I transfer fibers, I position my pipette in different places of the dish middle, side, etc so that fibers will be also be placed in different positions.

I never swirl the dish containing the fibers. I've never tried centrifugation. I've never perform WB on isolated single fibers. WB on whole muscle lysate is what we normally do. Hope this helps, best of luck, Alessandra. Hi Alessandra, Thanks a lot for the video, it has been very useful to get familiar with the fibers and have a protocol with images, which is always much more helpful.

I am interested in culturing the fibers to analyze the activated satellite cells by immunofluorescence. I would like to know your opinion regarding the following issues. Is it easier to get them activated in suspension or attached to the culture dish? Would you add growth factors to the culture medium?

Or is it enough to culture the fibers in suspension with high percentage of serum e. I usually find it difficult to get the fibers attached. When you culture them on matrigel-coated dishes, how long do they take to attach? I tried to do it with the fibers attached on matrigel-coated surfaces, but they usually detach during the protocol. I have also used polyester baskets, but the fibers get sticked to the net and I cannot recover them. IF in suspension may be the best way, but when you transfer each fiber to the glass slide, how can you avoid getting too much liquid on it?

I would greatly appreciate if you could give me some advice or some additional guidelines to follow. Thanks in advance,. Hi Neia, I'm glad you found our protocol useful. Specifically about your questions here are my suggestions: 1.

ISBN 13: 9783836547949

I've never done a side by side comparison of satellite cells activation pattern in floating vs attached fibers. I normally use cold pipettes and work on ice at all time when coating with matrigel. However satellite cells will all have migrated out the fibers. I' ve done IF at days and I dont recall fibers be that sensitive to manipulation in those early time points. I normally angle my pipette to the side so that washing solution wont be directly pointed to the fibers.

Hi Alessandra, I have tried the isolation twice now and I am mostly getting short hypercontracted fibers and hardly any long healthy ones.


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The isolation of the muscles seems perfect and then I digest the muscle with 0. Do you think you might have some useful hints for us? Cheers, Arunima. HI Arunima, you may want to adjust the incubation time..

Good luck, Alessandra. Dear Alessandra, Thank you very much for your work on the paper and the videos. The videos especially are extremely helpful. I am having a difficult time removing single fibers from the muscle bulk in the collagenase step. The last time I tried this I even increased the digestion time to 4 hours and I still am unable to remove a single fiber.

Would an increase in concentration be more helpful?

In general is it more useful to go by concentration i. Could you suggest a specific concentration either way? Thank you very much for your help! I really appreciate it! Hi Anna, Sorry I just read your message now. I never had any issue using mild digestion as recommended in the protocol, but if not, I'd say you could try increasing collagenase concentration.

Hi Rizwan, you could try increasing collagenase concentration. In my experience, however, hyper contracted fibers result from tissue over digestion. Alternatively you could try polishing the edges of your pipette to make sure there are no sharp edges that may damage your fibers. I usually expose the tendons first and then cut.

The first few fibers will be hypercontracated but then you should mainly get live fibers. Hope this helps, Alessandra. Thanks Alessandra, this indeed is very helpful. I increased collagenase concentration and got good number of healthy shiny fibers released, I keep a healthy margin of tendon intact so I'm pretty confident there, I realize I need to spend more time in flushing to get reasonable number of fibers, Many thanks - Rizwan. This content is Open Access. A verification has been sent to. Please check your email and follow the link to activate your 10 minute JoVE trial.

Can't find your verification email? To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. Pasut, A. Vedi Tabella 1 per una panoramica del protocollo. Filtrare la soluzione attraverso filtro 0,22 micron.

Nota: utilizzare DMEM con piruvato di sodio in tutta la procedura. Fibre non sopravvivono in sodio piruvato terreno privo. Mezzi di lavaggio utilizzare per eseguire tutti i lavaggi. Filtrare su 00,22 micron filtro prima dell'uso. Miofibre cultura dei media. Filtrare su filtro 0,22 micron prima dell'uso. Matrigel piatti rivestiti. Per le fibre di cultura per lungo periodo di tempo, si consiglia di utilizzare come substrato Matrigel rivestimento.

Piatti posto da rivestire su ghiaccio. Piatti Cappotto con volume appena sufficiente a coprire la superficie. Lasciate riposare per 1 minuto. Rimuovere completamente il Matrigel residuo. Tutti i piatti devono essere protette con siero di cavallo HS per evitare miofibre di attaccarsi alla plastica. Per cappotto, Pipettare 3 ml di siero di cavallo in ogni ricciolo piatto, per consentire anche rivestimento, rimuovere il siero di cavallo e lasciare il piatto asciugare per almeno 30 min. Aggiungere 4 ml di DMEM ad ogni piatto. Usare piatti HS rivestite in tutto l'intero protocollo e quando miofibre coltura sulle condizioni di galleggianti.

Per un isolamento in fibra 2 EDL , preparare due pipette Pasteur sterili: una pipetta di grande diametro per la manipolazione dei muscoli e una pipetta di piccolo diametro per la manipolazione delle miofibre. Utilizzare una penna di diamante per tagliare ogni pipetta di vetro per la lunghezza desiderata e lucidare il calore per lisciare pipetta bordi. Mediante la fiamma, curva la punta della pipetta di piccolo diametro.

Fiamma per sterilizzare. Cappotto ogni pipetta con HS prima dell'uso. Pin l'animale faccia in su ad un forum di supporto per avere una migliore comprensione del dell'arto posteriore durante la procedura. Con l'aiuto di forbici, tagliare l'intera lunghezza dell'arto e esporre il muscolo sottostante. Con una forbice fine, tagliare la fascia sottile senza danneggiare i muscoli sottostanti. Visivamente localizzare l'EDL. L'EDL si trova nel vano anteriore della dell'arto posteriore appena sotto il tibiale anteriore TA muscolare. Con l'aiuto di due pinze, esporre i tendini distali.

A questo punto dovreste essere in grado di vedere chiaramenteil muscolo EDL proprio sotto il muscolo TA.

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Evitare di stiramento del muscolo EDL durante l'esecuzione di questa operazione per evitare di danneggiare le miofibre. Esporre il tendine EDL. Tenendo il muscolo attraverso i tendini, trasferirlo in 2 ml di soluzione di collagenasi precedentemente preparata. Ripetere i passaggi 2,,9 per isolare la EDL secondo.

Davide Oldani: here’s my Milano nel piatto

Trasferire la EDL secondo nel tubo stesso. Nota 2: Se l'esame satellitare comportamento delle cellule in condizioni di quiescenza, durante il tempo di agitazione muscolare digestione possono attivare le cellule satelliti Durante il tempo di digestione, controllare regolarmente il muscolo per evitare un eccesso di digestione. Arrestare la digestione quando i muscoli cominciano a rilassarsi e miofibre sono visibili. Per arrestare la digestione, trasferire accuratamente entrambi i muscoli ad un piatto preriscaldato Petri con 4 ml di DMEM dissociatisul piatto.

Usare la pipetta grande diametro per eseguire questa operazione. Nota: evitare di overdigestion muscolare come questo inevitabilmente comporta l'isolamento di iper miofibre contratto. Singolo miofibre Dissociazione e Cultura Per rilasciare miofibre, utilizzare la pipetta di vetro di grandi dimensioni foro per irrigare il muscolo con il mezzo caldo fino a quando le fibre naturalmente iniziano ad essere rilasciato.

Eseguire questa e le seguenti operazioni sotto un microscopio da dissezione. Con le piccole dimensioni del foro pipetta, transfer vivere miofibre singole per un nuovo piatto preriscaldato primo di tre lavaggi consecutivi. Gestire ogni miofibre singolarmente invece di trasferire maggior parte delle miofibre tutto in una volta.

Ripetere il punto 3. Si consiglia almeno tre lavaggi consecutivi per una corretta pulizia. Abbiamo scoperto che la cultura immediata di miofibre nel siero terreno ricco di fibre aumenta il restringimento. Dopo un ora, trasferire miofibre di un nuovo piatto preriscaldato o nel formato appropriato culturaa seconda dell'applicazione a valle. Fibre di cultura in alta media siero per consentire l'attivazione delle cellule satellite. Cambiare mezzo ogni altro giorno. Applicazioni a valle Immunostaining.

Miofibre vivi possono essere fissate e colorate in qualsiasi punto nel tempo durante l'isolamento. Se la colorazione miofibre galleggianti, usare una pipetta di vetro piccolo foro per trasferire miofibre da una soluzione ad un'altra. Evitare aspirazione standard come questo comporta la rimozione delle miofibre pure. Soluzioni alternative di bloccaggio possono essere utilizzati, a seconda del anticorpo di interesse. Lavare una volta in PBS per 5 min. Lavare le fibre 3 volte a 5 minuti a lavaggio in PBS per rimuovere qualsiasi anticorpo non legato.

Incubare con l'appropriato anticorpo secondario per 45 minuti a 1 ora a temperatura ambiente. Lavare 3 volte in 5 minuti per lavaggio in PBS. Se la colorazione delle fibre flottanti, trasferire ciascuna fibra ad un vetrino adatto per microscopia. Eliminare l'eccesso di PBS o media.

Applicare montaggio medium e quindi aggiungere il coprioggetto. Procedere per visualizzare miofibre sotto un microscopio a fluorescenza. Vedere la Figura 4 per immunofluorescenza rappresentante a miofibre EDL. Procedure di colorazione alternativi utilizzando forti fissativi sono descritti in Verma, M. Oligonucleotide o plasmide trasfezione transiente.

Si consiglia di eseguire la trasfezione prima volta dopo 8 ore dall'isolamento. Sei ore dopo la trasfezione, sostituirlo con terreno fresco. Per la trasfezione siRNA, suggeriamo partenza utilizzando una concentrazione finale di 50 nM. Infezione virale.